PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒說明書
PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結合而產生熒光信號來精確定量樣品中DNA含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、 成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環境中DNA含量分析。產品嚴 格無菌，即到即用，性能穩定，高度敏感。
技術背景:
作為 DNA 染色劑之一的 PicoGreen 熒光染料特異性地與樣品中雙鏈 DNA 結合，產生熒光信號。PicoGreen 技術可以檢測到低達 0.5 納克雙鏈 DNA 的變化。DNA 的微量增加引起熒光信號強度（Intensity）或相對熒 光單位（RFU）的顯著增加。其自發熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復性標準差異（Standard Deviation） 低，不受樣品化學成分的干擾。
產品內容：
染色液（Reagent A） 微升
稀釋液（Reagent B） 毫升
標準液（Reagent C） 毫升
產品說明書 1 份
保存方式：
保存 染色液（Reagent A）和 標準液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里， 染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6個月
用戶自備1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板：用于熒光分析的容器 熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光定量分析
PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒實驗步驟：
一、 測定準備：
1．準備好待測樣品，置于冰槽里
2．設定好熒光分光光度儀（溫度為 37℃）：激發波長 480nm，散發波長 530nm，并置零
3．實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀釋液（Reagent B）到新的 1.5 毫升離心管，加入 xx 微升 染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標記為染色工作液，放在暗室里。然后進行下列操作。
二、 構建標準曲線：
1．準備好 5 個 1.5 毫升離心管，標記為 1 至 5 號管
2．分別加入 xx 微升 稀釋液（Reagent B）到每個離心管
3．移取 xx 微升 標準液（Reagent C）到 1 號管，混勻
4. 小心移取 xx 微升 1 號管稀釋的 標準液（Reagent C）到 2 號管，混勻
5．小心移取 xx 微升 2 號管稀釋的 標準液（Reagent C）到 3 號管，混勻
6. 小心移取 xx 微升 3 號管稀釋的 標準液（Reagent C）到 4 號管，混勻
7．將 1 至 5 號管放進冰槽里備用；標準管含量見下表：
管號 | 緩沖液（Reagent B） | 標準液（Reagent C） | 標準 DNA 總量 |
1 | xx 微升 | xx 微升 | xx 微克 |
2 | xx 微升 | xx 微升 1 號管 | xx 微克 |
3 | xx 微升 | xx 微升 2 號管 | xx 微克 |
4 | xx 微升 | xx 微升 3 號管 | xx 微克 |
5 | xx 微升 | 空對照 | 0 |
8．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀釋液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿
9．加入 500 微升上述配制的標準液
10．室溫下，孵育 5 分鐘，避免光照
11．即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
12.重復實驗步驟 8 至 11 四次
13.繪制標準曲線：縱座標（Y 軸）為相對熒光單位（RLU）；橫坐標（X 軸）為 DNA 含量（微克）
三、 樣品檢測
1．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀釋液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿
2．加入 500 微升待測樣品
3．室溫下，孵育 5 分鐘，避免光照
4.即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
5．根據標準曲線獲得樣品對應 DNA 含量（微克）
6．樣品實際 DNA 濃度：
PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒注意事項：
1．本產品為 20 次（比色皿）和 100 次（96 孔板）操作，包括標準曲線測定
2．操作時，須戴手套
3．使用新鮮配制的 染色工作液，務必不要超過 2 小時，且注意避光
4．建議使用塑料管配制 染色工作液，而不是玻璃制品
5．孵育時，避免光照
6．系統檢測，標準曲線測定 1 次即可；如果儀器更換，則需要重新測定 1 次
7．如果熒光讀數過高，可以相應稀釋樣品量
8．可以使用熒光酶標儀檢測，試劑用量和體系均除以 5，包括標準 DNA 含量，其計算公式[根據標準曲線獲得樣品對應DNA 濃度（微克）X樣品稀釋倍數]÷0.1（樣品容量；毫升）＝微克/毫升
9．鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈 DNA 和 RNA 不會干擾檢測
10.本公司提供系列DNA檢測試劑產品
質量標準：
1．本產品經鑒定性能穩定
2.本產品經鑒定高度敏感
使用承諾:
上海滬崢秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證 說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。
