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| 產(chǎn)地 | 國(guó)內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HXG697 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產(chǎn)品之一，產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) 樣品種類(lèi)多，質(zhì)控嚴(yán)格，高特異性，供貨快，已被國(guó)內(nèi)外廣大科研工作者使用，被稱謂：質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品
通用名稱：呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格：50T/盒
英文名稱：HastV Detection Kit (Real-Time PCR Method)
自備試劑：樣品 RNA
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒對(duì)呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）基因保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，從而達(dá)到快速檢測(cè)之目的。
試劑組成】
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名 稱 |
規(guī) 格 |
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酶液 |
50μL×1 管 |
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RSV-A反應(yīng)液 |
500μL×2 管 |
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RSV-A陽(yáng)性質(zhì)控品 |
50μl ×1 管 |
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陰性質(zhì)控品 |
250μl×1 管 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融不超過(guò) 5 次。有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g。
【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃。但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰代。
1.1 樣本前處理：
取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
2 DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
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試劑 |
Duck 反應(yīng)液 |
酶液 |
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用量 |
20μL |
1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測(cè)通道
（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
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步驟 |
循環(huán)數(shù) |
溫度 |
時(shí)間 |
收集熒光信號(hào) |
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1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
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2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
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55℃ |
30sec |
是 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項(xiàng)】
1. 每次使用，開(kāi)蓋之前請(qǐng)先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑應(yīng)立即放回。
3. 本試劑盒為10頭份量試劑，加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不 、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無(wú)結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。
4. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，應(yīng)高壓滅菌。
5. 注意防止試劑污染，在有效期限內(nèi)用完。
PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程， 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
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